2.2 Микроскопический метод

К микроскопическому методу прибегают в том случае, если макроскопический метод не дал должных результатов. Метод заключается в исследовании под микроскопом спороношений возбудителей или пораженных тканей растений.

Микроскопический анализ ценен тем, что позволяет обнаруживать характерные и безусловно точные признаки, присущие возбудителям (грибы, бактерии, вирусы), например, у грибов форму и цвет спор, форму сумок, наличие парафиз и др. Для практиков этот метод хорош в большей мере тем, что с его помощью можно установить наличие возбудителя в тканях растения, когда нет явных признаков поражения. При исследовании пораженных растительных тканей с целью обнаружения бесцветной или слабоокрашенной грибницы используют дифференцированное окрашивание. Так, для диагностирования инфекционного полегания производят окрашивание КМпО₄. С этой целью берут кусочек стебелька в области корневой шейки, размачивают его в капле воды и раскатывают до образования тонкой полоски ткани, затем наносят на эту полоску каплю 3-5 % раствора марганцевокислого калия. Через 2-3 минуты препарат промывают водой и рассматривают под микроскопом. В случае инфекционного характера болезни клетки тканей будут заполнены гифами гриба бурого цвета. При неинфекционном полегании в клетках просматривается сжавшаяся плазма.

При диагностировании шютте обыкновенного сосны на ранних стадиях развития продольные срезы хвои погружают на несколько минут в этиловый спирт, затем споласкивают водой и помещают в состав 1% раствора анилинового синего и молочной кислоты (1:1). После этого срезы подогревают до парообразования, краситель удаляют с помощью фильтровальной бумаги, а срез нагревают в молочной кислоте. При этом гифы гриба становятся синими или темно-голубыми и хорошо выделяются на светлом фоне тканей хвои.

Дифференцированную окраску грибов применяют также и при микроскопическом исследовании тканей древесины, пораженной дереворазрушающими грибами. Так, В. Рипачек рекомендует с целью окрашивания грибных гиф погружать срезы древесины в дистиллированную воду, к которой добавляют несколько капель 10% раствора азотнокислого серебра. После такой обработки гифы окрашиваются в темно-бурый цвет, а древесина приобретает лишь светло-коричневый оттенок.

По способу С.И. Ванина тонкие срезы пораженной древесины на предметном стекле обрабатывают 10 % раствором азотнокислого серебра, подогревают до кипения, затем смывают несколькими каплями воды и обрабатывают 10% раствором едкого калия (КОН). Снова доводят до кипения, отмывают в воде и рассматривают под микроскопом. Препарат окрашивается в бурый цвет, гифы становятся более темными, древесина – светлее.

При диагностике болезней бактериальной этиологии широко используют окраску по Грамму и другие методы окрашивания препаратов.