Физико-химические методы стимуляции выхода мирацидия из яиц трематод

Методы разработаны С.М.Герман и С.А.Беэром (1984) для определения жизнеспособности яиц описторхов и дикроцелиумов путем воздействия реакционной среды на яйца. Если они живые, происходит выхождение мирацидия. Методы основаны на физико-химической активации железы вылупления мирацидия и стимуляции двигательной активности личинки. Стимуляция достигается воздействием на яйца трематоды специальной реакционной среды в сочетании с последовательными приемами – созданием перепада температур, подсушиванием взвеси яиц, воздействием слабого тока жидкости в исследуемой капле, которые способствуют массовому выходу мирацидиев из яиц.

Определение жизнеспособности яиц описторха по методу Герман, Беэра. Взвесь яиц в воде (водопроводной, отстоявшейся) предварительно охлаждают до 10-12⁰С. Все последующие операции осуществляют при комнатной температуре (18-22⁰С). В центрифужную пробирку вносят одну каплю (примерно 0,05 мл) взвеси, содержащей 100-400 яиц. Пробирки ставят в штатив на 5-10 мин, чтобы осадить яйца. Затем узкой полоской фильтровальной бумаги осторожно отсасывают излишек воды до полного ее удаления. В пробирку добавляют 2 капли среды, встряхивают, содержимое переносят пипеткой на предметное стекло и оставляют на 5-10 мин, слегка покачивая (или же помещают под фен) для создания слабых токов жидкости в исследуемой капле взвеси. Эта операция, имитирующая перистальтику кишечника моллюска, позволяет активизировать выход мирацидиев. После этого к взвеси добавляют еще 2 капли среды и затем препарат микроскопируют с помощью обычного светового микроскопа (×200). За это время у яиц с жизнеспособным мирацидием должна открыться крышечка, при этом личинка активно выходит в среду. Благодаря наличию в ней этанола мирацидий через 3-5 мин обездвиживается, а затем прокрашивается красителем, находящимся в среде. В итоге легко обнаруживают и подсчитывают мирацидии.