Определение жизнеспособности яиц дикроцелиума по методу Герман, Беэра, Стратана

Каплю взвеси, содержащую 100-150 яиц трематоды, помещают в цетрифужную пробирку на 1-2 мин для осаждения яиц. Затем жидкость осторожно подсушивают с помощью полоски фильтровальной бумаги. Добавляют пастеровской пипеткой 1-2 капли реакционной среды и инкубируют на водяной бане при 28-30⁰С 2-3 мин. Состав среды: 6 частей бутанола, 94 части 0,4% раствора хлорида натрия или 0,3% раствора хлорида калия в дистиллированной воде. Яйца в среде переносят пипеткой на предметное стекло и оставляют на 1,5-2 ч при комнатной температуре (18-22⁰С), при этом каждые 25-30 мин (по мере подсыхания) добавляют по 1-2 капли (0,05 мл) раствора бутанола в дистиллированной воде. После этого препарат микроскопируют при 100-200 кратном увеличении. Жизнеспособность определяют по числу раскрывшихся яиц с вышедшими мирацидиями. Бутанол проникает через поры оболочки яиц, достигает мирацидиев и активизирует их. Инкубация при отмеченной температуре усиливает этот процесс. Бутанол в концентрации 3-7% губителен для вышедшего из яйца мирацидия. Перенос взвеси яиц из пробирки на предметное стекло позволяет к моменту выхода мирацидия (через 30-40 мин) снизить концентрацию бутанола за счет улетучивания до безопасного уровня (1,5- 0,5%). Наличие в среде хлорида натрия в концентрации 0,1- 0,5% (или хлорида калия в концентрации 0,05 - 0,4%) обусловливает активность вышедшего мирацидия. В отличие от мелких прозрачных яиц описторха яйца дикроцелиума имеют темноокрашенную оболочку, у них хорошо заметна крышечка, открытая после выхода мирацидия. Поэтому жизнеспособность яиц дикроцелиума удобнее оценивать путем подсчета раскрывшихся яиц, а не окрашивания и подсчета мирацидиев.